【項目動态】成(chéng)人呼吸道(dào)感染病原診斷核酸檢測技術臨床應用專家共識（2023）

日前，由中華檢驗醫學(xué)培訓工程專家委員會組織我國(guó)多學(xué)科專家共同撰寫的《成(chéng)人呼吸道(dào)感染病原診斷核酸檢測技術臨床應用專家共識（2023）》發(fā)表于《協和醫學(xué)雜志》。

共識參考國(guó)内外指南及文獻，分析了實時熒光聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）技術、等溫擴增技術、數字PCR技術、核酸即時檢測技術和病原體高通量測序技術的臨床應用場景、技術特點和性能(néng)驗證要求，以及該類技術在成(chéng)人急性上呼吸道(dào)感染、氣管支氣管炎、社區獲得性肺炎、醫院獲得性肺炎/呼吸機相關肺炎、慢性阻塞性肺疾病急性加重、肺結核和免疫功能(néng)受損人群呼吸道(dào)感染中的應用，供臨床借鑒參考。

01專家共識核心意見

共識主要分爲兩(liǎng)大部分，包括呼吸道(dào)病原體核酸檢測方法與呼吸道(dào)感染病原體臨床診斷。該共識納入國(guó)内外55篇相關文獻并經(jīng)過(guò)多輪撰寫修訂和讨論，最終形成(chéng)了基于核酸檢測技術和臨床應用場景的15條核心專家意見。

在核心專家意見中，明确了PCR核酸檢測方法不同技術方案在不同應用場景的推薦應用，并指出對(duì)于急性上呼吸道(dào)感染高危人群，尤其是在流感病毒、新型冠狀病毒等流行季節及高風險區域，采用實時熒光PCR、核酸即時檢測等技術可以實現發(fā)熱門診、門急診人群的呼吸道(dào)病原體的篩查，有利于病原體的早期診斷，對(duì)于存在住院風險的高危人群及社區獲得性肺炎患者，可采用多靶标病原體核酸檢測技術明确病原，可縮短抗生素使用時間和患者住院時間。

02呼吸道(dào)病原體核酸檢測方法

該部分涉及了以 PCR爲基礎發(fā)展出的實時熒光PCR、多重PCR、數字PCR和等溫擴增技術，以及核酸即時檢測技術、高通量測序技術等多種(zhǒng)技術方法，對(duì)其臨床應用場景、技術特點、性能(néng)驗證要求等進(jìn)行了詳細介紹，并對(duì)其優劣勢進(jìn)行了說明。

實時熒光PCR技術是一種(zhǒng)可對(duì)核酸進(jìn)行定量的試驗方法，其原理主要是通過(guò)實時采集熒光信号對(duì)核酸擴增進(jìn)行監測。在PCR擴增的指數時期，模闆的Ct值與其起(qǐ)始拷貝數存在線性關系，可實現對(duì)未知樣(yàng)本的定量檢測。主要适用于門急診、住院患者和大人群篩查。主要用于鼻咽拭子、痰和支氣管肺泡灌洗液等樣(yàng)本，已有單靶标和多靶标檢測試劑可用，特點是靈敏度和特異度好(hǎo)，但特異性引物探針的成(chéng)本和對(duì)儀器的要求較高。

等溫擴增技術相較傳統 PCR 變溫技術，通常不需要改變反應溫度，該技術方案多、技術原理差異較大，且各具優勢，但基本原理仍是以特異性酶和引物進(jìn)行擴增。等溫擴增技術大多爲指數擴增，目前多爲定性檢測。主要适用于發(fā)熱門診、急診患者上呼吸道(dào)感染病毒(如新型冠狀病毒、流感病毒等)及下呼吸道(dào)感染細菌(如肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌等)的快速篩查。

核酸即時檢測爲 POCT 技術中涉及核酸檢測的一大類技術的總稱， 是核酸提取技術和分子擴增技術（包括實時熒光 PCR 、巢式 PCR、等溫擴增、數字PCR等技術）的融和。其最大特點是將(jiāng)核酸的提取、擴增、檢測均置于一個反應裝置中，通過(guò)特定設備對(duì)擴增信号檢測，完成(chéng)對(duì)靶标核酸的篩查。目前核酸POCT主要以全自動封閉管理系統爲主。主要适用于發(fā)熱門診、急診、ICU和某些特定病區感染患者的病原體快速檢測。

病原體高通量測序技術是采用高通量測序技術對(duì)臨床标本中的核酸進(jìn)行測序，通過(guò)與微生物參考基因組比對(duì)獲取标本中的微生物物種(zhǒng)組成(chéng)、物種(zhǒng)豐度等信息。目前該技術主要分爲三類：無偏倚檢測的 mNGS、檢測多重病原體及其耐藥基因或毒力基因的tNGS 和獲取某一種(zhǒng)或多種(zhǒng)病原體全基因組數據的高通量測序技術（whole-genome sequencing ，WGS）。由于病原體高通量測序技術複雜、結果解讀難度大且價格昂貴， 建議根據臨床需求在傳統微生物檢測的基礎上選擇性使用，例如，需盡快明确病原學(xué)診斷時、目前可及的微生物檢驗手段無法明确診斷時、出現聚集性呼吸道(dào)傳染性病例需進(jìn)行病原體溯源時。

03呼吸道(dào)感染病原體臨床診斷

根據臨床特定場景涉及了急性上呼吸道(dào)感染、氣管支氣管炎、肺炎、慢性阻塞性肺疾病急性加重、肺結核及結核胸膜炎、免疫功能(néng)受損人群的呼吸道(dào)感染等多種(zhǒng)常見臨床呼吸道(dào)感染，對(duì)這(zhè)些病症的臨床表現、病原特點、檢測指征、标本與技術方法、檢測方案策略等進(jìn)行了詳細闡述，強調了各種(zhǒng)臨床病症應根據具體情況采用最适宜的檢測方法從而達到最佳診斷目标。

成(chéng)人呼吸道(dào)感染類型多樣(yàng)， 不同感染類型及不同基礎疾病患者病原譜各具特點，在臨床常規診療過(guò)程中，應以患者臨床症狀體征爲基礎，聯合應用影學(xué)、傳統微生物學(xué)、免疫學(xué)和分子生物學(xué)等檢測技術，依據相應檢測标準作出快速、精準診斷。分子生物學(xué)診斷技術在臨床的應用目前仍有較多問題亟待解決，尤其是對(duì)臨床結果的正确解讀。不同檢測技術所提供的結果具有不同臨床意義，聯合應用可進(jìn)一步提高病原學(xué)檢測的靈敏度和特異度， 更好(hǎo)的解釋患者的病程發(fā)展并進(jìn)行治療監測。

博奧晶典開(kāi)發(fā)出了針對(duì)呼吸道(dào)疾病感染解決方案，包含六項呼吸道(dào)病毒檢測、呼吸道(dào)病原菌核酸檢測系統、CCID™廣譜病原微生物芯片快速檢測、MAPMI®技術等，爲您的健康呼吸保駕護航。

快速、靈敏、準确

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六項呼吸道(dào)病毒核酸檢測試劑盒

博奧晶典六項呼吸道(dào)病毒核酸檢測試劑盒采用一步法RT-PCR-熔解曲線技術，選取待檢病原體核酸特異性保守序列設計特異性引物和探針，基于特定的熒光通道(dào)和熔解曲線Tm值，能(néng)夠快速檢測包括呼吸道(dào)合胞病毒在内的六類臨床常見的呼吸道(dào)病原體，實現對(duì)患者的精準診斷、精準治療。

呼吸道(dào)病原菌核酸檢測系統

作爲微流控芯片與恒溫核酸擴增技術完美結合的産品，博奧晶典呼吸道(dào)病原菌核酸檢測系統能(néng)夠對(duì)病原微生物分子進(jìn)行快速、高通量并行檢測，一次可檢測肺炎鏈球菌、流感嗜血杆菌、金黃色葡萄球菌等8種(zhǒng)常見的呼吸道(dào)感染相關病原微生物，檢測報告時間縮短到2小時。

目前，呼吸道(dào)病原菌核酸檢測試劑及配套儀器平台均獲得了NMPA醫療器械注冊證書，受到臨床普遍歡迎。其中，高通量恒溫擴增核酸分析儀可以同時實現多人份樣(yàng)本的獨立并行檢測，極大地滿足了當前大中型醫院在感染性疾病診斷領域實現規模化檢測的臨床需求。

呼吸道(dào)病原菌核酸檢測試劑盒（恒溫擴增芯片法）

（國(guó)械注準：20173401346）

恒溫擴增微流控芯片核酸分析儀

（國(guó)械注準：20173401354）

恒溫擴增核酸分析儀

（國(guó)械注準：20193220539）

CCID™廣譜病原微生物芯片快速檢測

博奧晶典CCID™廣譜病原微生物芯片快速檢測可在4-8小時鑒定173種(zhǒng)病原微生物，其中包含臨床常見的74種(zhǒng)細菌及寄生蟲、22種(zhǒng)真菌、40種(zhǒng)病毒及37種(zhǒng)細菌耐藥基因，并且在檢測完成(chéng)後(hòu)對(duì)陽性指标進(jìn)行定量複檢，給出參考濃度、輔助臨床醫生判定病情。

MAPMI®技術

MAPMI®（Metagenomic Analysis Pipeline for Microbial Identification）技術是博奧晶典基于自主的BES4000高通量測序平台研發(fā)的超廣譜病原體篩查技術，覆蓋3.2萬種(zhǒng)的病原微生物及5339種(zhǒng)耐藥基因，可直接對(duì)樣(yàng)本中的核酸進(jìn)行檢測，快速、精準的獲得樣(yàng)本中微生物序列信息，可對(duì)病原體的變異情況進(jìn)行進(jìn)一步追蹤監控，在新發(fā)、突發(fā)重大疫情的監控及快速反應體系構建上具有重大現實意義。同時，基于檢測結果及患者臨床特征，對(duì)可疑緻病微生物按照不同感染部位提供個體化用藥提示，實現感染性疾病的診斷、用藥全流程診療。

BES4000基因測序儀

（國(guó)械注準：20203220502）

MAPMI® 2.0 “mNGS+抗感染用藥參考”在病原體的快速、準确和全面(miàn)鑒定的同時，基于超廣譜病原微生物（mNGS）檢測結果及患者臨床特征，對(duì)可疑緻病微生物按照不同感染部位提供個體化用藥提示，直擊感染性疾病診療痛點，提高診療效率，降低耐藥風險；全面(miàn)用藥信息提示，綜合臨床信息，快速用藥決策，減少耐藥及不良反應的發(fā)生；整合了國(guó)内外權威的臨床用藥專著，以及抗感染相關指南和專家共識，爲疾病的診斷，治療提供有力的證據，減少誤診，誤治，決策更安全。